結(jié)果

與測試化合物孵育后脂質(zhì)CMC的變化。帶負電荷的脂質(zhì)diC8PS本質(zhì)上是兩親性的，在水溶液中聚集并形成膠束，產(chǎn)生更親脂的微環(huán)境。當Prodan與膠束相互作用時，其熒光發(fā)射發(fā)生了變化。從diC8PS的熒光濃度分布中觀察到不連續(xù)性（圖2），過渡脂質(zhì)濃度為其CMC（CMCL=1.1毫克/毫升；L-脂質(zhì)）。該CMC值與Vitovic在類似測試條件下使用表面張力方法測定的值相似。27當將測試化合物硫利扎定添加到基質(zhì)中時，復(fù)合物（CMCDL；DL，藥物脂質(zhì)復(fù)合物）的CMC變?yōu)?.042 mg/mL(圖2)。在樣品中脂質(zhì)濃度高于0.5 mg/mL時，熒光信號被淬滅，給出較低的值；但這并不影響CMC的確定。CMCDL和CMCL之間的比率被用來量化這種轉(zhuǎn)變。

測定了45種商業(yè)化合物的藥物脂質(zhì)復(fù)合物的CMC值，并與在人類、動物或培養(yǎng)細胞中觀察到的PLD進行比較（表1）。正如文獻中所建議的那樣，這些化合物分別分為四類。19,27 CMC偏移的程度由CMC比率(CMCDL/CMCL)表示（圖3）。將來自人類、動物或培養(yǎng)細胞的PLD數(shù)據(jù)與使用這種熒光方法檢測到的CMC偏移進行比較（圖3）并使用CMC比率在

作為截止值0.75，大多數(shù)化合物在體內(nèi)和體外數(shù)據(jù)之間表現(xiàn)出一致的排名，除了兩個：華法林和氨氯地平。據(jù)報道，華法林20和氨氯地平10體內(nèi)PLD較低或沒有，但在該熒光測定中觀察到CMC變化。

濃度依賴性。體內(nèi)研究中PLD的程度是劑量依賴性的。24,33在體外試驗中，濃度控制可用于估計劑量依賴性。一組七種報告的PLD誘導(dǎo)劑分別以三種不同的濃度進行了測試：910、91和9.1μM（圖4）。對于氯喹和酮康唑，要么它們在10 mM時不能完全溶解在DMSO中，要么在使用10 mM DMSO儲備液時與緩沖液混合后鹽析出來，它們的最高濃度點被去除。所有化合物都表現(xiàn)出對CMC的濃度依賴性，以不同程度改變PLD誘導(dǎo)潛力。即使在910μM時，芬氟拉明似乎也是一種弱誘導(dǎo)劑，而硫利達嗪在不同濃度之間顯示出顯著變化。根據(jù)該體外數(shù)據(jù)，在9.1μM的最低濃度下，七種化合物中沒有一種似乎能夠誘導(dǎo)PLD。復(fù)合自聚合。與磷脂類似，大多數(shù)PLD誘導(dǎo)劑是兩親性的。盡管帶有不同的電荷跡象，但它們也可以聚集并形成膠束。拉貝洛爾20,34和奎尼丁35被報道為PLD誘導(dǎo)劑；然而，在所應(yīng)用的測試條件下，我們無法確定任何一種藥物脂質(zhì)復(fù)合物的CMC。獲得的RFU值等于或低于空白（含熒光探針但不含脂質(zhì)的化合物）中的值。進一步研究了不同藥物濃度但沒有脂質(zhì)（0 mg/mL脂質(zhì)），并且在無脂質(zhì)測定緩沖液中，拉貝洛爾和奎寧的CMC值分別為26和20μM。這些CMC值遠低于這些化合物在PLD篩選中的測試濃度，并且懷疑化合物的自聚集會干擾藥物脂質(zhì)復(fù)合物形成的檢測，從而使CMCDL無法確定。

代謝物誘導(dǎo)的PLD。為了研究代謝對PLD的影響，選擇了10種具有主要代謝事件的化合物，并使用報告的測定篩選了它們的主要代謝物，表現(xiàn)出不同的行為（圖5和表2）。去乙基胺碘酮是胺碘酮的主要代謝物，其脂質(zhì)結(jié)合能力比其母體高近10倍。對于氯喹、氯氮平和米安色林，它們的代謝物屬于PLD非誘導(dǎo)劑組，與作為誘導(dǎo)劑的母體化合物相矛盾。由于溶解度限制，8-羥基米安色林和去甲基氯氮平的測試濃度為0.091 mM，低于其母體化合物的濃度(1 mM)。

表1

與它們的母體化合物相比，其他代謝物顯示出相當?shù)腜LD誘導(dǎo)潛力，而其他代謝物則沒有。

圖3.在pH 7.2的熒光測定中觀察到的CMC偏移（由藥物脂質(zhì)復(fù)合物(DL)的CMC和單獨的脂質(zhì)(L)的CMC之間的比率表示：CMCDL/CMCL）與體內(nèi)人體內(nèi)的比較體內(nèi)動物或體外細胞PLD分析。CMCDL/CMCL的臨界值為0.75，將PLD誘導(dǎo)劑（b，體內(nèi)測定；[，細胞測定）與PLD非誘導(dǎo)劑(9)分開，只有兩個異常值：氨氯地平和華法林。

圖4.CMC移位（通過將藥物-脂質(zhì)復(fù)合物（DL的CMC之間的比率表示）和單獨的脂質(zhì)（L）的CMC：CMC測試化合物與二FF erent科幻最終在濃度樣品孔在pH7.2。

測定pH影響。PLD中的脂質(zhì)紊亂主要在構(gòu)成酸性的溶酶體區(qū)室中觀察到環(huán)境。為了模擬溶酶體條件，pH 4.8醋酸鹽在PLD篩選研究中使用緩沖液，25種進行研究使用上述相同的程序商業(yè)化合物（表1）對。大多數(shù)化合物在結(jié)果相似兩種緩沖液中的；然而，胺碘酮、氯米帕明、米安色林和華法林給出了截然不同的數(shù)據(jù)，將前三種化合物從PLD誘導(dǎo)劑轉(zhuǎn)移到非誘導(dǎo)劑，將華法林劑轉(zhuǎn)移從非誘導(dǎo)到誘導(dǎo)劑，從pH 7.2到pH 4.8。

Delta-8使用新方法測試CMC，而不是表面張力測試法——摘要

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