1.2.2 IC50（半數(shù)抑制濃度）和IL-1a的體外測量

人角質形成細胞(HaCaT)培養(yǎng)：HaCaT細胞由國家認證細胞庫保藏和提供。細胞在補充有熱滅活胎牛血清(10%)、L-谷氨酰胺(2 mmol/L)、青霉素和鏈霉素(100 U/mL)的DMEM中，在37℃、5%CO2的濕潤氣氛中培養(yǎng)。細胞每3天以1:3的比例傳代。

單層細胞活力測定：使用CCK-8法分析HaCaT細胞活力。簡言之，將細胞培養(yǎng)并以每孔1 x 10^4個細胞的密度接種在96孔板中。然后用不同濃度的各種表面活性劑樣品處理HaCaT細胞24小時。然后加入CCK-8溶液，在37℃下孵育1小時。用酶標儀在450 nm處測量吸光度。數(shù)據(jù)以陰性對照的百分比表示（即%存活率）。

酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)測定：HaCaT細胞用不同濃度的各種樣品處理24小時。表面活性劑暴露后，回收條件培養(yǎng)基，離心并用于測定細胞外IL-1a的釋放。根據(jù)制造商的說明進行分析。

1.2.3體外溫和性比色指數(shù)(CIM)和Zeta電位

體外CIM測量：將一片D-squame膠帶應用于指定區(qū)域。使用壓頭確保膠帶均勻粘附在皮膚上10秒。每個測試區(qū)域收集兩條膠帶，將第二條膠帶浸入10%稀釋溶液中10分鐘。然后用流動自來水沖洗一分鐘（直到水變清），然后風干。之后，將膠帶用堿性品紅甲苯胺藍染料溶液染色3分鐘，然后用流動自來水沖洗一分鐘。招募了31名志愿者進行測試，每位受試者（18-60歲）均簽署了書面知情同意書，研究方案經(jīng)內(nèi)部審查委員會批準。受試者總體健康狀況良好，測試部位（前臂屈側）沒有紋身、割傷、劃痕、擦傷和疤痕。

使用CM-26d色度計測量染色程度。在每次測量開始前進行校準以確保準確性。使用CIE Lab*標度從每個D-squame樣品進行測量。使用以下公式計算CIM：

CIM=L-C=L-[(a)^2+(b*)^2]^{1/2}(1)

其中L代表亮度，a是紅-綠，b是黃-藍，C是彩度。

CIM值越高，產(chǎn)品的溫和性越好。

使用MICROTRAC MRB Zeta電位分析儀STABINO ZETA測量每種測試溶液的Zeta電位。每個樣品至少收集12個數(shù)據(jù)。溶液用蒸餾水稀釋10倍，最終溶液中表面活性劑的活性物含量為1.8%，與CIM測試條件相同。

1.2.4人體皮膚斑貼試驗

人體皮膚斑貼試驗：封閉斑貼試驗按照《化妝品安全技術規(guī)范》(2015)第七章第二節(jié)方法6.1進行。實施皮膚反應分級。并根據(jù)公式計算刺激得分：

IS=Σ(同一等級在各時間點的總發(fā)生次數(shù)*反應等級)(2)

TIS=IS/樣本量

其中IS代表刺激得分；TIS代表總刺激得分。

招募了44名志愿者，獲得33份有效數(shù)據(jù)。每位受試者（18-60歲）均簽署了書面知情同意書，研究方案經(jīng)內(nèi)部審查委員會批準。受試者總體健康狀況良好，測試部位（前臂屈側）沒有紋身、割傷、劃痕、擦傷和疤痕。表面活性劑復合物在使用于前臂皮膚前稀釋至2%。因此，表面活性劑的活性物含量為0.36%，高于常規(guī)斑貼測試。

1.2.5統(tǒng)計分析

細胞模型或體外方法的所有結果均顯示為平均值±標準差(SD)或平均值±平均值的標準誤差(SEM)。SD和SEM根據(jù)至少3個獨立實驗的值計算，每個實驗有3個重復。

皮膚斑貼試驗的結果用SPSS 27進行分析。評估數(shù)據(jù)不呈正態(tài)分布，采用Wilcoxon符號秩檢驗方法進行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計方法的顯著性水平為P<0.05。

2結果與討論

如前所述，由于技術限制，很難通過生物過程生產(chǎn)具有足夠清潔能力的海藻糖脂。本研究中使用的海藻糖脂來自酯交換過程，烷基鏈長度為12至14個碳。本文評估了海藻糖脂及其復合物的泡沫和溫和性性能。

2.1單一表面活性劑和表面活性劑復合物的理化性質

表2總結了本研究中使用的所有單一表面活性劑在25℃和0.1%活性物條件下的表面張力值。SMCT的表面張力最低(20.50 mN/m)，其次是海藻糖脂(24.45 mN/m)，而CAPB的表面張力最高(33.40 mN/m)。

表2表面活性劑在25℃和0.1%活性物時的表面張力

如圖2所示，比較了海藻糖脂和其他常見化妝品表面活性劑在pH 6.5下的發(fā)泡性能。所有表面活性劑，包括海藻糖脂，在pH 6.5下都能解離并具有表面活性。結果表明，陰離子表面活性劑如SMCT或SLES的發(fā)泡能力最好，其次是癸基葡糖苷、椰油酰胺丙基甜菜堿、海藻糖脂和月桂基葡糖苷。這與普遍理解一致，即陰離子表面活性劑通常具有良好的去污力和發(fā)泡性能，而非離子表面活性劑由于缺乏帶電頭基而相對較弱。在陰離子表面活性劑中，SMCT的泡沫體積優(yōu)于SLES。這與表2中SMCT的表面張力低于SLES有關。作為一種新型非離子表面活性劑，海藻糖脂的泡沫體積優(yōu)于LG，但仍不如DG。這可能歸因于它們碳鏈分布的差異以及表面張力的差異。與LG相比，DG具有較短的碳鏈，更容易遷移到氣液界面，因此它們的發(fā)泡性能也不同。本研究中使用的海藻糖脂具有與LG相似的碳鏈分布，但如表2所示，其表面張力較低，使其具有更好的泡沫性能。